结肠“瑞士卷”制片法

在肠道病理研究中如何完整保留小鼠结肠的全层结构、同时避免人为损伤一直是实验操作的难点。本文分享一套改良版“瑞士卷”制片技术无需剖开肠管、无需机械顶压即可获得高质量的全结肠切片特别适合炎症、隐窝异常等病变的连续观察。处死与开腹根据实验需求可提前12-16小时禁食不禁水以减少肠内容物。采用颈椎脱臼法快速处死小鼠立即用75%酒精擦拭腹部。沿腹中线剪开皮肤和肌肉暴露腹腔找到回盲部呈囊袋状并识别远端结肠粗细交界处。冲洗与分离结肠离断肠管在结肠粗细交界处剪断注意保留系膜侧约2 mm避免损伤血管。冲洗技巧用1 mL移液器吸取PBS或Krebs液将枪头水平对准肠管断端保持同轴方向轻轻推入。缓慢推注液体观察粪便和残渣从另一端排出。冲洗2-3次直至流出液清澈即可。切忌用力过猛导致肠管过度扩张。剥离系膜从近端向肛门方向小心剥离系膜完整取下整段结肠。制作瑞士卷先固定还是先卷建议将新鲜冲洗后的结肠直接放入4%多聚甲醛中固定24小时。如果固定时间过长超过48小时组织会变脆。此时可以先用固定液涮一下立即取出卷制无需线扎也能成型。卷制操作将固定好的结肠平铺在滤纸上用眼科镊夹住一端向系膜侧轻轻卷起形成紧实的螺旋状。可用细线临时固定然后放入包埋盒进行石蜡包埋。切片与染色切片厚度4-5 μm常规HE染色后封片观察。关键要点提醒处死后操作要快最好在3分钟内完成冲洗和分离防止组织自溶或痉挛。冲洗压力宁小勿大移液枪头比注射器针头更友好因为枪头尖端是漏斗形更容易无损伤插入。卷制时不要用力拉拽肠管保持自然弧度即可。系膜必须剔除干净否则影响切片质量。常见问题解答问用移液枪冲洗和用注射器有什么区别我以前用注射器总是冲不干净还容易把肠管冲破。答移液枪的枪头前端细小且呈锥形可以轻松进入肠腔而不刮伤内壁。注射器针头或塑料尖端往往较粗、边缘锐利加上如果操作中不小心扯断了系膜肠道会立即痉挛收缩内容物就被“锁”住了。按本方法保留系膜、快速操作3分钟内完成并用移液枪温和冲洗基本不会出现损伤。问先固定再卷组织不会变得又硬又脆、一卷就碎吗答关键在固定时间。24小时刚好组织有一定韧性又保留形态。如果固定超过2天确实会脆化。补救办法是从固定液里取出后用PBS涮一下趁还湿润时立即卷制动作轻柔不用线绑也能成型。问需要把肠管纵向剪开铺平吗答完全不需要。本方法的最大亮点就是不剪开肠管直接完整卷曲切片时从侧面切下去就能同时看到所有层次。