「1图1表格」从Mallory到Masson染色：洞察肌纤维免疫组化三颜色的奥秘

如果你着急去染色看完图片保存好就撤吧。如果你认为内容有帮助点个赞或推荐再走吧。接下来我们将会开启“废话”模式在图片内容的基础上唠一唠Masson三色染色法的历史、染色原理、核心操作步骤的关键机制。一、百年传承从Mallory到Masson1880年代美国病理学家Frank Burr Mallory首次在组织切片的染色过程中使用苯胺蓝Aniline Blue目的是让组织中的胶原纤维显色。但是该技术仅能粗略显色纤维结构不能区分纤维类型。1929年法国/加拿大病理学家Claude L. Pierre Masson对Mallory法进行改良实现了三色体系细胞核呈现蓝黑色胞质、肌纤维为红色胶原纤维为蓝色或绿色。时至今日Masson三色染色仍被《Theory and Practice of Histological Techniques》第8版收录是结缔组织染色领域的参考方法之一。二、Masson染色技术原理拆解因为染料分子大小与组织渗透性存在差异在Masson染色过程中先将多种成分染成红色再通过选择性分化去除胶原中的红色接着用苯胺蓝将胶原纤维染成蓝色与肌纤维形成鲜明的颜色对比。整个染色过程可以拆分为四步01核染Weigert铁苏木素与DNA稳定结合。铁离子的存在增强了染料结合的稳定性在后续酸性环境中不掉色。02胞质红染酸性品红-丽春红与细胞质中的蛋白质通过静电结合肌纤维、胶原纤维等被染成红色。其中丽春红分子量大结合牢固酸性品红分子量小渗透性强二者协同作用使细胞质着色均匀。03磷钼酸分化磷钼酸在Masson染色中具有双重作用既是选择性分化剂又是媒染剂实现胶原纤维与肌纤维清晰区分的关键。磷钼酸可以置换出胶原纤维中的红色染料但不能从致密的肌纤维和细胞质中去除该染料。磷钼酸中的酸性基团可作为桥梁连接去色后的胶原纤维与后续染料增强其结合力提高染色对比度。04终染苯胺蓝或亮绿属于大分子酸性阴离子染料与胶原纤维形成稳定复合物将其染成蓝色或绿色实现与肌组织、细胞质的色彩区分。三、Masson配方详解从“抄配方”到“懂配伍”目前商用试剂很成熟价格也不高建议大家直接买就行。如果非要自己配置可以参考下列配方1. Weigert氏铁苏木素液A液苏木素1g无水乙醇100mLB液30%三氯化铁水溶液4mL 蒸馏水95mL 盐酸1mL现用现配。使用时将A液和B液等量混合混合后溶液呈紫黑色。提前配会氧化失效。2. 丽春红酸性品红液丽春红0.7g酸性品红0.3g蒸馏水99mL冰醋酸1mL溶解后过滤。冰醋酸用来调pH避免染料沉淀染色效果更稳定3. 1%磷钼酸溶液磷钼酸1g加蒸馏水99mL充分溶解后过滤备用。正常为淡黄色变蓝会失效需要重新配4. 2%苯胺蓝染液苯胺蓝2g加蒸馏水98mL再加冰醋酸2mL充分溶解后过滤备用。可以换成1%亮绿染液亮绿1g蒸馏水98mL冰醋酸2mL5. 1%盐酸酒精分化液浓盐酸1mL加无水乙醇99mL混合均匀。6. 1%盐酸终止液浓盐酸1mL加蒸馏水99mL混合均匀。Masson通过核染、红染、选择性分化、终染四步递进的染色过程实现细胞核、肌纤维与胶原纤维的三色区分是结缔组织病理染色的经典免疫组化实验之一。