卡梅德生物技术快报｜基于 CHO 细胞的百日咳毒素中和抗体检测方法构建与验证

摘要针对百日咳疫苗质控中功能性指标检测的需求构建基于 CHO K1 细胞的百日咳毒素PT中和抗体检测方法完成方法学验证与稳定性考察并验证其在疫苗质控中的应用价值。结果表明该方法专属性、准确性、精密性良好能有效检测血清中的中和抗体与 ELISA 法检测结果具有显著相关性可为百日咳联合疫苗的研发与质量控制提供高效的体外技术手段。关键词CHO 细胞百日咳毒素中和抗体方法学验证疫苗质控在无细胞百日咳疫苗的研发与生产质控中中和抗体是评价疫苗免疫原性与保护性的核心功能性指标其检测方法的建立与优化是生物制药领域的重要技术需求。传统检测方法存在诸多局限因此本研究构建一种体外高效检测中和抗体的方法为疫苗质控提供技术支撑。本研究选用 ATCC 来源的 CHO K1 细胞系纯化 PT、PTd 等试剂为自制实验动物为 SPF 级 NIH 小鼠制备疫苗免疫血清作为检测样本。方法构建围绕 PT 浓度与 CHO 细胞浓度两个核心参数优化最终确定 8 ng/mL PT 与 1.0×10⁵个 /mL CHO 细胞为最佳实验条件在此条件下 PT 能稳定引发细胞簇集血清稀释梯度可呈现明显的簇集变化。中和抗体检测的标准化流程为96 孔板中加入梯度稀释血清与 8 ng/mL PT37℃中和 3~4 h加入 CHO 细胞悬液继续培养 44~48 h镜下观察细胞簇集情况以少于 50% 细胞簇集的最高血清稀释度为中和效价实现对中和抗体的定量检测。方法学验证结果显示该方法专属性良好抗 PT 阳性血清 1∶512 稀释后仍具有中和作用抗 FHA、PRN 血清及阴性对照无中和效应准确性方面血清稀释后实际检测效价与理论值偏差≤2 倍精密性上日内检测 CV 最大值 6.3%日间检测 CV 最大值 12.9%均低于 15% 的可接受阈值。同时第 10~30 代 CHO 细胞、不同批次 PT 对检测结果的影响在可接受范围内方法稳定性良好。将该方法应用于 23 批含 PTd 联合疫苗免疫血清检测中和抗体效价分布为 16~512与 ELISA 法检测的抗 PT-IgG 结果 Pearson 相关系数为 0.73呈显著正相关验证了方法的实际应用价值。该方法操作简便、检测效率高能直接检测功能性中和抗体弥补了传统方法的不足适合企业实验室开展疫苗研发与质控检测。综上本研究建立的 CHO 细胞中和试验能有效检测百日咳毒素中和抗体方法性能符合疫苗质控要求可作为百日咳联合疫苗研发、批间一致性监测的重要体外技术手段为疫苗质量控制提供精准的数据支撑。